PCR方法在人類及動(dòng)植物疾病基因診斷、食品 分析 和環(huán)境監(jiān)測(cè)等領(lǐng)域發(fā)揮著舉足輕重的作用，其靈敏度高、特異性好，是目前最精準(zhǔn)的基因診斷方法。然而PCR方法操作起來較復(fù)雜，對(duì)儀器和人員要求比較高，不適合基層或現(xiàn)場快速診斷，因此在國內(nèi)的推廣速度并不是很快。
2000年日本學(xué)者Notomi在Nucleic Acids Res雜志上公開了一種新的基因診斷技術(shù)，即LAMP ，中文名為“環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)”，受到了世衛(wèi)組織WHO、各國學(xué)者和相關(guān)政府部門的關(guān)注，短短幾年，該技術(shù)已成功地應(yīng)用于SARS、禽流感、HIV等疾病的檢測(cè)中，在這次甲型H1N1流感事件中，日本榮研化學(xué)公司接受WHO的邀請(qǐng)進(jìn)行H1N1 LAMP試劑盒的研制。通過榮研公司近十年的推廣，LAMP技術(shù)已廣泛應(yīng)用于日本國內(nèi)各種病毒、細(xì)菌、寄生蟲等引起的疾病檢測(cè)、食品化妝品安全檢查及進(jìn)出口快速診斷中，并得到了歐美國家的認(rèn)同。LAMP方法的優(yōu)勢(shì)除了高特異性、高靈敏度外，操作十分簡單，對(duì)儀器設(shè)備要求低，一臺(tái)水浴鍋或恒溫箱就能實(shí)現(xiàn)反應(yīng)，結(jié)果的檢測(cè)也很簡單，不需要像PCR那樣進(jìn)行凝膠電泳，LAMP反應(yīng)的結(jié)果通過肉眼觀察白色渾濁或綠色熒光的生成來判斷，簡便快捷，適合基層快速診斷。
可以預(yù)見，在未來的基因診斷領(lǐng)域，LAMP方法將占據(jù)大壁江山。
1. 優(yōu)缺點(diǎn)介紹：
LAMP方法優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高（比傳統(tǒng)的PCR方法高2～5個(gè)數(shù)量級(jí)）；反應(yīng)時(shí)間短（30～60min就能完成反應(yīng)）；臨床使用不需要特殊的儀器（試劑盒研發(fā)階段推薦用實(shí)時(shí)渾濁儀）；操作簡單（不論是DNA還是RNA，檢測(cè)步驟都是需將反應(yīng)液、酶和模板混合于PCR管中，置于水浴鍋或恒溫箱中63℃左右保溫30～60min，肉眼觀察結(jié)果）。
LAMP方法缺點(diǎn)：靈敏度高，一旦開蓋容易形成氣溶膠污染，加上目前國內(nèi)大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室不能嚴(yán)格分區(qū)，假陽性問題比較嚴(yán)重，因此我們強(qiáng)烈推薦在進(jìn)行試劑盒的研發(fā)過程中采用實(shí)時(shí)渾濁儀，不要把反應(yīng)后的PCR管打開；引物設(shè)計(jì)要求比較高，有些疾病的基因可能不適合LAMP方法。
2. 對(duì)比目前國內(nèi)實(shí)驗(yàn)室同類檢測(cè)設(shè)配使用情況
目前國內(nèi)基因診斷常采用PCR方法，涉及到PCR儀，該儀器價(jià)格國產(chǎn)和進(jìn)口價(jià)格不一，便宜的2～3萬也能買到，貴的20多萬。條件比較好的實(shí)驗(yàn)室和國家機(jī)構(gòu)也有嘗試熒光定量 PCR方法的，該方法技術(shù)含量高，必須使用熒光定量PCR儀，價(jià)格在20～70萬不等。
LAMP產(chǎn)品在臨床診斷中是不需要特殊儀器的，但臨床使用的成品試劑盒有賴于和國內(nèi)擁有毒株的老師合作開發(fā)針對(duì)中國國情的疾病LAMP引物，在研發(fā)過程中由于涉及引物的選擇，引物濃度的調(diào)整，及反應(yīng)溫度和時(shí)間的優(yōu)化，需要用一種量化的方式去幫助 研究 者 分析 選擇數(shù)據(jù)，因此我們推薦用榮研公司的專利產(chǎn)品LA-320C實(shí)時(shí)基因擴(kuò)增儀。
3. 操作的便捷性
LAMP方法較其他基因診斷方法，其最大的優(yōu)勢(shì)就在于操作的簡便性及對(duì)儀器設(shè)備和人員要求低。LAMP操作步驟少，只需按照說明書要求將反應(yīng)液、酶、引物和模板按照規(guī)定的量加入PCR管中，置于水浴鍋或恒溫箱反應(yīng)30～60min，通過肉眼觀察反應(yīng)管是否變?yōu)榘咨珳啙峋湍芘袛嘟Y(jié)果。
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